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影片开始于1957年，冷战高峰时期。印第安纳·琼斯（哈里森·福特）和助手Mac（雷·温斯顿）在美国西南荒漠一个偏僻的飞机场和苏联间谍展开了一场激烈的追逐。
好不容易脱险的琼斯回到马歇尔大学后才发现等待他的情况更糟，他的密友、学院院长Dean Charles Stanforth（吉姆·布劳德本特）告诉他，他最近的一系列行为让政府对他产生了怀疑，他们向学院施压要求开除琼斯。
在出城的路上，琼斯遇见了叛逆的年轻人Mutt（萨·拉比夫），后者其实就是琼斯和玛丽昂（卡伦·艾伦）的孩子，但琼斯此时还不知道。Mutt提出让琼斯帮他完成一个打赌的任务，并称这个任务有可能会让琼斯做出历史上最杰出的考古发现——也就是传说中神秘的“阿卡特水晶头骨”（the Crystal Skull of Akator）。
于是一老一小两个琼斯来到秘鲁密林，这里是古代墓地、传说中的黄金城的所在地。但很快他们发觉寻找“水晶头骨”的不止他们，苏联间谍们也在各处搜寻，为首的是一个冷酷、凶狠的美女间谍Irina Spalko（凯特·布兰切特），她带着一支精锐部队贪婪的寻找着“水晶头骨”，因为他们认为如果解开“水晶头骨”的秘密，就能帮助苏联称霸世界。
琼斯和Mutt一方面要躲开苏联人，另一方面仍要赶在他们之前找到“水晶头骨”以防止其落入亡命徒和野心家的手中，但这趟冒险的路上充满了各种他们无法想象的困难…… | 
